Исследование структуры комплекса эндонуклеазы рестрикции EcoRII с помощью биохимических и спектральных методов



Реферат:На основе изучения субстратных свойств ДНК-дуплексов, содержащих в участке узнавания EcoRII остатки 1-('бета'-D-2'-дезокси-трео-пентафуранозил)цитозина или 1-('бета'-D-2'-дезокси-трео-пентафуранозил)тимина, а также (Rp)- или (Sp)-тиофосфатную группу, выделены девять из двенадцати фосфатных групп, необходимых для функционирования эндонуклеазы EcoRII. С помощью анализа субстратных свойств ДНК-дуплексов, содержащих остатки (+)- или (-)-транс-анти-бензо[а]пирена-N2dG в участке узнавания EcoRII, установлено, что как эффекторные, так и каталитические домены эндонуклеазы EcoRII образуют контакты с группами атомов ДНК, расположенными в малой бороздке. С помощью фотоаффинной модификации эндонуклеазы EcoRII ДНК-дуплексами, содержащими остаток 5-йодо-2'-дезоксиуридина, идентифицирована область 224VEYD227, сближенная с центральной нуклеотидной парой участка узнавания. Изучен перенос энергии возбуждения в комплексе эндонуклеазы EcoRII с ДНК между красителями, присоединенными к разным концам ДНК, содержащей два участка узнавания. Предложена модель комплекса эндонуклеазы EcoRII с ДНК, согласно которой участки узнавания сближены на расстояние 20+-10 А и располагаются под углом 70+-10 градусов.
Автор:Субач Федор Васильевич
Тип диссертации:1
Дата защиты:Dec. 20, 2005
Количество страниц:142
Руководители: Громова Е.С. д.х.н. 02.00.10
Оппоненты: Демидкина Т.В. д.х.н. 03.00.03
Солонин А.С. к.б.н. 03.00.03
Ключевые слова: